体外哺乳动物细胞染色体畸变试验仪

　　体外哺乳动物细胞染色体畸变试验仪
 

　　一、 仪器介绍
 

　　实验目的：
 

　　本试验检测受试物是否引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价受试物致突变的可能性
 

　　实验概述：
 

　　在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙胺)处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变。
 

　　大部分的致突变剂导致染色单体型畸变,偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着有染色体数目畸变的可能,但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变。
 

　　应用范围
 

　　应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域
 

　　二、试验流程
 

　　1）细胞培养
 

　　选择合适细胞系，在含血清培养基中培养至对数生长期。
 

　　2）受试物处理
 

　　设置多个浓度组(需包括细胞毒性评估，如50%生长抑制浓度)
 

　　阳性对照
 

　　阴性对照(溶剂对照)
 

　　3.）代谢活化系统（S9混合液）
 

　　模拟体内代谢，用于检测需代谢激活的致突变物(如加Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9)
 

　　4.）采样时间
 

　　短期处理:1个细胞周期(通常24小时，含或不含S9)
 

　　长期处理:覆盖多个细胞周期(如48小时)
 

　　5）染色体制备
 

　　秋水仙素(或秋水仙胺)处理:阻断中期细胞。
 

　　低渗处理(KCI溶液)使细胞膨胀。
 

　　固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片，Giemsa染色。
 

　　6）镜检分析
 

　　显微镜下观察至少200个中期分裂相，记录畸变类型和频率。
 

　　三、仪器与试剂
 

　　关键仪器：
 

　　培养箱、生物安全柜、离心机、显微镜(配备油镜和图像分析系统)
 

　　染色体自动扫描仪(可选)
 

　　主要试剂:
 

　　细胞培养基、胎牛血清。
 

　　秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。