体外哺乳动物细胞基因突变试验仪

　　体外哺乳动物细胞基因突变试验仪
 

　　一、 仪器介绍
 

　　实验目的：
 

　　本试验用于检测受试物对体外培养的哺乳动物细胞的基因突变作用,包括碱基对突变、移码突变和缺失等,从而评价受试物引起突变的可能性
 

　　实验概述：
 

　　本试验属正向突变试验,可检出碱基置换型致突变物和移码型致突变物。在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使细胞暴露于受试物一定时间,然后将细胞传代培养。胸苷激酶水平正常的细胞对(trifluorothymidine,TFT)等敏感,因而在培养液中不能生长分裂,突变细胞则不敏感,在含有的选择性培养液中能继续分裂并形成集落。相似的磷酸核糖基酶(HPRT)正常的细胞对 6-硫代(6-thioguanine,6-TG)敏感,突变的细胞则不敏感,在含有 6-硫代的选择性培养液中可生长形成集落。基于突变集落数,计算突变频率以评价受试物的致突变性。
 

　　应用范围
 

　　应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域
 

　　符合标准：
 

　　GB/T 15670.20-2017《农药登记毒理学试验方法第20部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验》
 

　　二、试验流程
 

　　1）细胞培养:
 

　　选择合适细胞系(如L5178Y、CHO)，常规传代培养
 

　　2）受试物处理:
 

　　暴露于不同浓度受试物(需设阴性/阳性对照)
 

　　3）表达期:
 

　　预留足够时间(通常7-10天)使突变表型显现。
 

　　4.）突变体筛选:
 

　　TK试验:使用(TFT)筛选TK突变体。
 

　　HPRT试验:使用6-硫代(6-TG)选HPRT突变体。
 

　　5）克隆形成分析:
 

　　计数突变集落，计算突变频率(突变集落数/存活细胞数)
 

　　6）数据统计:
 

　　与对照组比较，判断突变率是否显著增加。
 

　　三、注意事项
 

　　1）细胞活力控制:受试物浓度需保证细胞存活率(通常>50%)
 

　　2）代谢活化系统:需加入S9混合物(模拟体内代谢，(如Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9)。
 

　　3）假阳性/阴性:避免pH、渗透压等非特异性因素干扰。
 

　　4）合规性:   遵循国际指南(如OECD 490、ICH S2R1)。
 

　　计算：